數字PCR儀是分子生物學研究非常重要的工具,是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,基本原理是在試管中模擬細胞內的DNA復制,即人為創(chuàng)造核酸半保留復制條件,使目的DNA在細胞外完成擴增的過程,它可被看作是生物體外的特殊DNA復制。
數字PCR儀維護保養(yǎng)
需要注意以下問題:
實驗室使用的基因擴增儀,熒光定量PCR儀都是高精度儀器。一旦儀器出現一些溫度或者檢測上的小偏差,則很可能對實驗結果產生較大的影響。因此,學會日常保養(yǎng)和維護是尤為重要的。
1、儀器安置
儀器應安放在濕度較低、灰塵較少并遠離水源和熱源的地方,無腐蝕性氣體或強磁場干擾。
環(huán)境溫度建議在18~35℃之間。儀器之間應保持50cm以上距離,降低儀器之間的影響。
2、樣品臺、熱蓋定期清潔
用95%乙醇配合棉簽、無塵布等工具,清潔樣品臺。之后運行數字PCR儀,設定保持溫度為50℃,約5~10min,讓殘余液體揮發(fā)去除。
另外,熱蓋也應該用酒精或純水定期清洗,確保熱蓋清潔,溫控性能良好。對于熒光定量PCR,清潔樣品臺和熱蓋的同時,去除灰塵等雜物,保證光路清潔,降低信號干擾。
3.使用前預熱
老款的PCR儀的性能比不上新款儀器,使用前需要進行預熱,不僅對儀器維護有好處,還能節(jié)約實驗時間。新款的儀器升溫快,但還是建議最好能在進行實驗前預熱2min,這樣可以有效延長儀器的使用壽命。
4.定期運行維護
1.數字PCR儀需要定期檢測,視制冷方式而定一般半年至少一次。
2.PCR反應的要求溫度與實際分布的反應溫度是不一致的,當檢測發(fā)現各孔平均溫度差偏離設置溫度大于1~2℃時,可以運用溫度修正法糾正PCR實際反應溫度差。
3.PCR反應過程的關鍵是升、降溫過程的時間控制,要求越短越好,當PCR儀的降溫過程超過60s,就應該檢查儀器的制冷系統(tǒng),對風冷制冷的PCR儀要較*地清理反應底座的灰塵;對其他制冷系統(tǒng)應檢查相關的制冷部件。
4.一般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時,不要輕易打開或調整儀器的電子控制部件,必要時要請專業(yè)人員修理或利用儀器電子線路詳細圖紙進行維修。